如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoRI酶...

问题详情：

如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR I酶切为例）：

请据图回答问题：

（1）步骤I用的EcoR I是一种__________酶，它通过识别特定的__________切割特定位点。

（2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷*之间的3′-羟基与5′-**间形成__________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。

（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________（从引物①②③④中选择，填编号）。

（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷*序列），结果正确的是_________________。

A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′

B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′

C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′

D． 5′- TTGATACGO----------CGAGTAC-3′

【回答】

    (1). 限制*核*内切（或限制）    (2). 核苷*序列    (3). **二酯键    (4). DNA单链    (5). 以DNA为模板的DNA链的延伸    (6). ②④    (7). B

【解析】

【分析】

采用PCR技术扩增DNA的过程为：变*、退火、延伸、终止，PCR技术扩增目的基因的原理：DNA双链复制，引物是一小段单链DNA，引物5′端的碱基可以与DNA两条链的3′端的碱基进行碱基互补配对，可作为DNA复制的起始点，子链的延伸方向从5′→3′。

【详解】（1）EcoR I是一种限制*核*内切酶，它通过识别特定的核苷*序列切割特定的位点。

（2）DNA连接酶可催化相邻核苷*之间的3'-羟基和5'-**之间形成**二酯键；PCR循环中，升温到95℃时，DNA受热变*后解旋为单链；Taq DNA聚合酶是一种耐高温的依赖于DNA模板的DNA聚合酶，能催化以DNA链为模板的DNA链的延伸。

（3）引物是一小段单链DNA，引物5'端的碱基可以与DNA两条链的3'端的碱基进行碱基互补配对，可作为DNA复制的起始点，子链的延伸方向从5'→3'，据题图分析，结合已知序列可知，能与片段F左边配对的引物为④，与右边配对的引物为②，故步骤Ⅲ选用的PCR引物应当为②④。

（4）对PCR产物测序，得到片段F的完整序列，因为片段F是被限制酶EcoR I剪切的两端，它识别的序列是GAATTC，且在G与A之间切割，所以5'端应该是AATTC，3'端是GAATT，故选B。

【点睛】本题主要考查PCR的过程和应用，意在强化考生对PCR技术的理解，要求考生能分析题图提取有效信息，从引物碱基序列、延伸方向等方面进行分析和解答，对考生的理解和分析能力提出了较高要求。

知识点：生物技术的安全*和伦理问题

题型：综合题